Se abre la puerta de la cámara y se introducen en ella las cestas llenas de artículos que deben esterilizarse.

El autoclave se activa mediante el ordenador de control, que automatiza y supervisa el proceso de esterilización. En primer lugar, se abre una válvula que permite que el agua fluya hacia la cámara por la fuerza de la gravedad. Una vez que la cámara tiene suficiente agua, se cierra la válvula.

El autoclave activa su calentador, lo que eleva la temperatura del agua y genera vapor. Se abre la válvula de escape y el vapor expulsa el aire de la cámara, que es evacuado a través del depósito Ecofill.

Una vez que se ha expulsado todo el aire de la cámara, se cierra la válvula de escape. A medida que se genera más vapor, este no tiene por dónde salir, lo que provoca que aumente la presión en la cámara. El aumento de la presión del vapor ejerce una fuerza hacia abajo sobre el agua, lo que requiere más energía térmica para que las moléculas de agua se escapen y se conviertan en vapor. A medida que el agua continúa calentándose, se produce vapor a temperaturas superiores a 100 °C. Cuando se alcanzan temperaturas superiores a 121 °C, los artículos que se encuentran en la cámara comienzan a esterilizarse. A 121 °C, se requiere un mínimo de 30 minutos para la esterilización. A temperaturas más altas, la esterilización se produce más rápidamente.

Una vez finalizada la esterilización, se abre una válvula y la presión generada por el vapor en la cámara expulsa el agua de la cámara de vuelta al depósito Ecofill. El agua de la cámara está ahora caliente y conservará ese calor para contribuir a un proceso de esterilización posterior. Esto ayuda a eliminar el calor de la cámara, permitiendo que se enfríe más rápidamente.

El vapor a presión se expulsa por el conducto de escape a través del depósito Ecofill, captando agua y calor.

La cámara y su contenido se enfrían. A medida que esto ocurre, la presión en la cámara desciende hasta igualarse a la del entorno exterior. Una vez igualada la presión, se puede abrir la puerta de la cámara y retirar los artículos, que ahora están esterilizados.