Dveře komory se otevřou a do komory se vloží koše plné předmětů, které je třeba sterilizovat.

Autokláv se spouští prostřednictvím řídicího počítače, který automatizuje a řídí proces sterilizace. Nejprve se otevře ventil, který umožní proudění vody do komory působením gravitace. Jakmile je v komoře dostatek vody, ventil se uzavře.

Autokláv zapne topné těleso, které ohřívá vodu a vytváří páru. Otevře se výfukový ventil a pára vytlačuje vzduch z komory ven přes výfuk do zásobníku Ecofill.

Jakmile je veškerý vzduch vytlačen z komory, výfukový ventil se uzavře. Jak se vytváří další pára, nemá kam unikat, což způsobuje nárůst tlaku v komoře. Rostoucí tlak páry působí na vodu, což vyžaduje více tepelné energie, aby molekuly vody mohly uniknout a přeměnit se na páru. Jak se voda dále ohřívá, vzniká pára při teplotách nad 100 °C. Jakmile teplota dosáhne hodnoty nad 121 °C, předměty v komoře se začnou sterilizovat. Při teplotě 121 °C je pro sterilizaci zapotřebí minimálně 30 minut. Při vyšších teplotách probíhá sterilizace rychleji.

Po dokončení sterilizace se ventil otevře a tlak páry v komoře vytlačí vodu zpět do zásobníku Ecofill. Horká voda v komoře si uchová své teplo pro podporu následného sterilizačního cyklu a zároveň napomáhá odvodu tepla z komory, což urychluje její ochlazování.

Tlaková pára je odváděna z výstupu přes zásobník Ecofill, čímž dochází k zachycení vody a tepla.

Komora a její obsah se ochlazují. Při tom tlak v komoře klesá, až se vyrovná s vnějším prostředím. Jakmile dojde k vyrovnání tlaku, lze otevřít dvířka komory a vyjmout nyní sterilní předměty.