Pintu Ruang dibuka, dan keranjang-keranjang yang berisi barang-barang yang perlu disterilkan dimasukkan ke dalam Ruang.

Autoklaf diaktifkan melalui komputer pengendali, yang mengotomatiskan dan mengendalikan proses sterilisasi. Pertama, katup dibuka sehingga air mengalir ke dalam ruang sterilisasi berkat gaya gravitasi. Setelah ruang sterilisasi terisi air secukupnya, katup ditutup.

Autoklaf mengaktifkan pemanas untuk memanaskan air dan menghasilkan uap. Katup pembuangan dibuka, sehingga uap tersebut memaksa udara keluar dari ruang dan dikeluarkan melalui saluran pembuangan via tangki Ecofill.

Setelah seluruh udara terdesak keluar dari ruang sterilisasi, katup pembuangan ditutup. Seiring bertambahnya uap yang dihasilkan, uap tersebut tidak memiliki tempat untuk keluar, sehingga menyebabkan tekanan di dalam ruang sterilisasi meningkat. Tekanan uap yang semakin tinggi menekan air, sehingga membutuhkan lebih banyak energi panas agar molekul air dapat melepaskan diri dan berubah menjadi uap. Seiring air terus dipanaskan, uap dihasilkan pada suhu di atas 100°C. Pada suhu di atas 121°C, benda-benda di dalam ruang mulai disterilkan. Pada suhu 121°C, diperlukan waktu minimal 30 menit untuk proses sterilisasi. Pada suhu yang lebih tinggi, proses sterilisasi berlangsung lebih cepat.

Setelah sterilisasi selesai, katup dibuka, dan tekanan yang dihasilkan oleh uap di dalam ruang memaksa air keluar dari ruang dan kembali ke Reservoir Ecofill. Air di dalam ruang kini panas dan akan menyimpan panas tersebut untuk membantu proses sterilisasi berikutnya. Hal ini membantu menghilangkan panas dari ruang, sehingga ruang dapat mendingin lebih cepat.

Uap bertekanan dikeluarkan melalui saluran pembuangan ke Reservoir Ecofill, sehingga menangkap air dan panas.

Ruang dan isinya mendingin. Seiring proses pendinginan, tekanan di dalam ruang turun hingga menyamai tekanan lingkungan luar. Ketika tekanan telah seimbang, pintu ruang dapat dibuka, dan barang-barang yang kini steril dapat dikeluarkan.