A kamra ajtaját kinyitják, és a sterilizálásra szoruló tárgyakkal teli kosarakat betöltik a kamrába.

Az autoklávot a vezérlő számítógépen keresztül indítják el, amely automatizálja és irányítja a sterilizálási folyamatot. Először kinyit egy szelepet, amely lehetővé teszi, hogy a víz a gravitáció hatására beáramoljon a kamrába. Amint a kamrában elegendő víz gyűlt össze, a szelepet elzárják.

Az autokláv bekapcsolja a fűtőelemét, felmelegíti a vizet és gőzt termel. A kivezető szelep kinyílik, és a gőz kiszorítja a levegőt a kamrából, amely az Ecofill tartályon keresztül távozik a kivezetőnyíláson.

Miután az összes levegőt kiszorították a kamrából, a kivezető szelepet bezárják. Ahogy további gőz keletkezik, annak nincs hová távoznia, így a kamrában a nyomás emelkedik. A növekvő gőznyomás nyomást gyakorol a vízre, így több hőenergiára van szükség ahhoz, hogy a vízmolekulák elszabaduljanak és gőzzé váljanak. Ahogy a víz tovább melegszik, 100 °C feletti hőmérsékleten gőz keletkezik. Amikor a hőmérséklet meghaladja a 121 °C-ot, a kamrában lévő tárgyak sterilizálódni kezdenek. 121 °C-on a sterilizáláshoz legalább 30 perc szükséges. Magasabb hőmérsékleten a sterilizálás gyorsabban zajlik le.

A sterilizálás befejezése után kinyitnak egy szelepet, és a kamrában lévő gőz által kifejtett nyomás kiszorítja a vizet a kamrából, vissza az Ecofill-tartályba. A kamrában lévő víz ekkor forró, és megtartja ezt a hőt, hogy elősegítse a következő sterilizálási folyamatot. Ez segít elvezetni a hőt a kamrából, így az gyorsabban lehűlhet.

A nyomás alatt álló gőz a kipufogón keresztül távozik az Ecofill tartályon keresztül, magával ragadva a vizet és a hőt.

A kamra és tartalma lehűl. Ezzel párhuzamosan a kamrában lévő nyomás a külső környezeti nyomáshoz igazodik. A nyomáskiegyenlítés után a kamra ajtaja kinyitható, és a most már steril tárgyak kivehetők.