A porta da câmara é aberta e os cestos cheios de artigos que necessitam de esterilização são colocados na câmara.

A autoclave é ativada através do computador de controlo, que automatiza e controla o processo de esterilização. Em primeiro lugar, abre-se uma válvula que permite que a água flua para o interior da câmara sob a força da gravidade. Assim que a câmara tiver água suficiente, a válvula é fechada.

O autoclave ativa o aquecedor, elevando a temperatura da água e gerando vapor. A válvula de escape é aberta, permitindo que o vapor expulse o ar da câmara, que é direcionado para o reservatório Ecofill.

Assim que todo o ar tiver sido expulso da câmara, a válvula de escape é fechada. À medida que se gera mais vapor, este não tem para onde ir, fazendo com que a pressão na câmara aumente. A pressão crescente do vapor exerce uma força descendente sobre a água, exigindo mais energia térmica para que as moléculas de água escapem e se transformem em vapor. À medida que a água continua a ser aquecida, produz-se vapor a temperaturas superiores a 100 °C. Quando atinge temperaturas superiores a 121 °C, os itens na câmara começam a ser esterilizados. A 121 °C, são necessários, no mínimo, 30 minutos para a esterilização. A temperaturas mais elevadas, a esterilização ocorre mais rapidamente.

Assim que a esterilização estiver concluída, é aberta uma válvula e a pressão produzida pelo vapor na câmara força a água a sair da câmara e a regressar ao reservatório Ecofill. A água na câmara está agora quente e irá reter esse calor para auxiliar num processo de esterilização subsequente. Isto ajuda a retirar calor da câmara, permitindo que arrefeça mais rapidamente.

O vapor pressurizado é expelido pela saída de escape através do reservatório Ecofill, captando água e calor.

A câmara e o seu conteúdo arrefecem. À medida que isso acontece, a pressão na câmara diminui até se equiparar à do ambiente exterior. Quando a pressão estiver equalizada, a porta da câmara pode ser aberta e os artigos, agora esterilizados, podem ser removidos.