Se abre la puerta de la cámara y se introducen en su interior los artículos que se van a esterilizar. En este ejemplo, los objetos a esterilizar se encuentran dentro de contenedores desechables Morrison. Cuando el generador de vapor detecta un nivel bajo de agua, se rellena automáticamente.

La bomba de vacío extrae el aire de la cámara, creando una presión más baja en su interior y expulsando parte del aire atrapado dentro de los artículos que requieren esterilización.

Se abre una válvula y el vapor procedente del generador de vapor llena la cámara, aumentando la presión en su interior y expulsando aún más aire atrapado en los artículos que se encuentran en la cámara.

La presión en la cámara pasa por ciclos repetidos de presurización con vapor, seguidos de despresurización mediante vacío. Esto comprime y expande el aire atrapado en la cámara, expulsándolo de las cavidades hasta que todo el aire haya sido reemplazado por vapor.

El generador de vapor continúa funcionando, agregando más vapor a la cámara del autoclave. A medida que se agrega más vapor, la presión y la temperatura aumentan. Una vez que la cámara alcanza los 121 °C o más, comienza la esterilización de la carga. La temperatura se mantiene durante un período predefinido para garantizar una esterilización completa.

Una vez finalizada la esterilización, se cierra la válvula del generador de vapor y la cámara se enfría. A medida que la temperatura y la presión disminuyen, el vapor se condensa en agua, que se acumula en el fondo de la cámara. Cuando la presión se estabiliza, una válvula drena el agua y la puerta de la cámara puede abrirse de manera segura.