Kammerdøren åpnes, og gjenstandene som skal steriliseres plasseres inne i kammeret. I dette eksemplet er gjenstandene som skal steriliseres plassert i Morrison-avfallsbeholdere.Når dampgeneratoren har lite vann, fyller den seg automatisk opp igjen.

Vakuumpumpen suger ut luft fra kammeret, noe som skaper lavere trykk inne i kammeret og frigjør noe av luften som er fanget inne i gjenstandene som skal steriliseres.

En ventil åpnes, og damp fra dampgeneratoren fyller kammeret, noe som øker trykket inne i kammeret og frigjør mer av luften som er fanget inne i gjenstandene i kammeret.

Trykket i kammeret gjennomgår gjentatte sykluser der kammeret først trykksettes med damp, deretter trykkavlastes med vakuum. Dette komprimerer og utvider luften som er fanget i kammeret, og driver den ut av lommer inntil all luft er erstattet av damp.

Dampgeneratoren fortsetter å gå og tilfører mer damp til autoklavkammeret. Etter hvert som mer damp tilføres, stiger trykket og temperaturen.Når kammeret når 121 °C eller høyere, begynner steriliseringen av lasten. Temperaturen holdes oppe i en forhåndsdefinert periode for å sikre fullstendig sterilisering.

Når steriliseringen er fullført, stenges ventilen til dampgeneratoren, og kammeret avkjøles. Mens temperaturen og trykket synker, kondenserer dampen til vann som samler seg på bunnen av kammeret.Når trykket er utjevnet, tømmes vannet ut gjennom en ventil, og kammerdøren kan åpnes på en sikker måte.